1. Käytä online-suodattimia
Linjasuodatin sijoitetaan automaattisen näytteenottimen ja kromatografisen kolonnin (tai suojakolonnin) väliin. Tavalliset rivisuodattimet on jaettu ruostumattomasta teräksestä valmistettuihin rivisuodattimiin, joissa on vaihdettava fritti (0,5 μm tai 0,2 μm) ja kertakäyttöiset PEEK-suodattimet. Eri materiaaleista valmistetuille online-suodattimille on yleensä valittava seulalevy, jonka aukko on pienempi kuin pylvään frittilevyn, jotta hiukkaset, jotka voivat tukkia kromatografisen kolonnin frittilevyn, siepataan tehokkaasti. Kun havaitaan, että instrumentin paine alkaa nousta, on mahdollista, että linjassa oleva suodatinfritti alkaa tukkeutua ja meidän on päivitettävä se ennen kuin se tukkeutuu kokonaan.
In-line-suodattimet toimivat kuten kalvot, mutta ne eivät vaadi lisätyötä. Näytteen sentrifugoinnin jälkeen on edelleen mahdollista, että pieni määrä hiukkasia pääsee instrumenttiin, ja jäännöspartikkelit voidaan siepata kromatografiakolonnin edessä sijaitsevalla in-line-suodattimella. Lisäksi online-suodattimen etuna on, että se on yksinkertainen ja helppo vaihtaa. Yleensä sen vaihtaminen kestää vain 5 minuuttia, ja se voidaan käynnistää uudelleen käyttöä varten, eikä sen tarvitse käyttää aikaa säätämiseen tai kalibrointiin. Toinen etu on, että in-line-suodatin voi myös suodattaa pois hiukkaset, jotka syntyvät joidenkin instrumentin osien ikääntymisestä ja repeytymisestä. Kannatan vahvasti sitä, että jokainen nestefaasiinstrumentti on varustettu in-line-suodattimella. Vaikka suojapylväs olisi käytössä, suosittelen myös linjasuodattimen asentamista ennen suojapylvästä.
2. Käytä suojapylvästä
Suojakolonni on lyhyt kromatografinen kolonni, joka on asennettu kromatografisen kolonnin eteen. Se on yleensä 1-2 cm pitkä, ja tiiviste on sovitettu käytettävän kolonnin täytteen kanssa, eikä käytetyn fritin huokoskoko ole suurempi kuin kolonnissa käytetyn fritin. Suojakolonnissa on kaksi tehtävää: (1) se voi tukkia hiukkaset, jotka voivat tukkia kolonnin; (2) Koska suojakolonni ja kolonnin tiiviste sopivat yhteen, kaikki kemialliset epäpuhtaudet, jotka voivat olla peruuttamattomasti vuorovaikutuksessa kolonnin tiivisteen kanssa ilman huippuutumista, vangitaan ensin suojakolonniin.
Suojapilarin käyttö voi varmasti pidentää pilarin käyttöikää. Ennen kuin harkitset suojapilarin käyttöä, on kuitenkin suositeltavaa arvioida seuraavat seikat:
(1) Suojapylväs ei ole halpa, joten harkitse, voidaanko suojapilarin ostokustannuksia kompensoida pylvään pidentyneellä käyttöiällä;
(2) Kuinka pitkä vartiopylvään käyttöikä on? On tarpeen kiinnittää huomiota siihen, milloin suojakasetti on vaihdettava, jotta kromatografiakolonni ei saastuta, koska vaihto on liian myöhäistä;
(3) Kuinka suojapilari huuhdellaan? Huuhtelun aikana suojakolonni ja kromatografiakolonni on pestävä erikseen, jotta suojakolonniin kertyneet epäpuhtaudet eivät huuhtoutuisi kromatografiseen kolonniin;
(4) Älä odota kolonnin tehokkuutta lisäävän 1-2 cm:n suojapylvään. Vaikka suojapilarin asentaminen on samanlaista kuin pilarin pituuden lisääminen, suojapilarin käyttöön lisätään myös kaksi liitintä ja yhdysputkia, mikä heikentää instrumenttijärjestelmän pilarin tehokkuutta, joten olisi hyvä, jos kolonnin hyötysuhde ilman suojata sarake voitaisiin säilyttää.
Sanomattakin on selvää, että suojapylväiden käyttö voi toki pidentää pilarin käyttöikää, mutta on suositeltavaa, että jokainen laboratorio arvioi suojapylväiden tarpeen taloudellisen ja vaivan kannalta. Jopa suojapylvään kanssa suosittelen linjasuodattimen asettamista suojapylvään ja automaattisen näytteenottimen väliin, koska linjassa olevan suodattimen vaihtaminen on halvempaa kuin suojapilarin vaihtaminen ja pidentää sekä suojapilarin että kolonnin käyttöikää .
3. Älä syötä käsittelemättömiä näytteitä
Esikäsittelyllä tai ilman, on suositeltavaa, että kaikki näytteet suodatetaan tai sentrifugoidaan ennen injektiota. Esimerkiksi kun näyte suodatetaan suodatinkalvon läpi hiukkasten poistamiseksi ja siten kromatografiakolonnin fritin tukkeutumisen vähentämiseksi, suodatinkalvon huokoskoon tulee olla pienempi kuin kromatografiakolonnin fritin huokoskoon. Yleensä kromatografiakolonneissa, joissa on yli 3 μm:n hiukkasia, käytetään 2 μm:n frittiä, kromatografiapylväissä, joissa on 3 μm:n hiukkasia, käytetään 0,5 μm frittiä ja kolonneissa, joissa on alle 3 μm:n hiukkasia, yleensä 0,2 μm frittiä, joten yleisiä 0,45 μm:n suodattimia voidaan periaatteessa käyttää kaikissa kromatografisissa kolonneissa paitsi sub-2 μm:n hiukkasissa; kolonneissa, joissa on alle -2 μm hiukkasia, käytetään yleensä suodattimia, joiden huokoset ovat 0,2 μm. Useimmat suodatinkalvot ovat valmiiksi pakattuja, ja ne voidaan liittää suoraan ruiskuun suodatusta varten tai käyttää suodatinlevynä 96-kuoppalevyssä.